致畸胎試驗

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1、 致畸胎試驗 致畸胎試驗2.3.10.1 目的 檢測消毒劑對妊娠實驗動物有無致畸胎性，確定其未觀察到發育毒性的劑量。2.3.10.2 試劑 （1)1/1000 茜素紅溶液:茜素紅 0.1g，氫氧化鉀 10g，加蒸餾水 1000m1。（2)透明液 A:甘油 200ml，氫氧化鉀 10g，蒸餾水 790ml。（3)透明液 B:甘油與蒸餾水等量混合。（4)固定液(Bouins 液):苦味酸飽和液 75 份，甲醛 20 份，冰醋酸 5 份。2.3.10.3 實驗動物 試驗用大鼠或小鼠(必要時可用家兔)。用大鼠和小鼠試驗時，取健康、性成熟、未交配過的體重為 200g250g 的大鼠，或體重為25g30g

2、 的小鼠。2.3.10.4 試驗分組 至少設 4 組，其中 3 個為試驗組，1 個為陰性對照組。每組至少有 15 只孕鼠。高劑量組可用雌鼠的 1/10LD50作為試驗劑量；低劑量組，可用雌性動物的 1/100LD50作為試驗劑量。其間設中劑量組。陰性對照組以受試物的溶劑代替受試物進行試驗。陽性對照組常用阿司匹林(300mg/kg 體重)、敵枯雙(1mg/kg 體重)或維生素A(40000IU)。對于實驗室首次進行的種或品系必需設陽性對照組。為了保證試驗方法的可靠性，每隔半年需用陽性對照物檢查一次。2.3.10.5 操作程序 （1）將雌鼠和雄鼠按 1:1 或 2:1 的比例同籠飼養。每日晨觀察陰

3、栓(或陰道涂片)。查出陰栓或精子的當天定為孕期零天。如 5d內未交配，調換雌鼠。查出的孕鼠按上述隨機分組，并進行稱重和編號。（2）在大、小鼠孕期 6d15d 期間，每天用灌胃法給予受試物。分別于孕期 0d、6d、10d、15d 和 20d 稱重孕鼠，并根據體重調整受試物給予量。注意觀察并記錄孕鼠的毒性反應。（3）大鼠于孕期第 20d，小鼠于孕期第 18d，用頸椎脫臼法處死。剖腹，取出子宮稱重，檢查活胎、吸收胎、早期死胎和晚期死胎數。（4)逐個記錄活胎鼠的性別、體重、身長和尾長。外觀檢查頭面部、軀干部、四肢等有無畸形，諸如皮下出血、露腦、腦膨出、眼部畸形(無眼或開眼等)、鼻孔擴大、單鼻孔、唇裂、

4、脊柱裂、四肢和尾畸形、肛門閉鎖等。（5）每窩取約 1/22/3 活胎鼠，用眼科鑷剝皮。取出內臟(注意勿拉斷肋骨)，去掉后頸和兩肩胛骨之間的脂肪塊。將胎鼠放入茜素紅溶液染色。當天搖動玻璃瓶 2 次3 次。待骨骼染成紅色時為止。將胎鼠換入透明液 A 中 1d2d，換入透明液 B 中 2d3d。待胎鼠骨骼已染紅，而軟組織的紫紅色基本褪去，可換置甘油中。（6)將染好的標本連同甘油一并倒入含水平皿內，在解剖顯微鏡下，用透射光源，先觀察胎鼠全身，然后逐步檢查:頭骨、胸骨、脊椎骨、肋骨和四肢等有無骨化不全、骨化遲緩和其他缺陷。觀察脊椎骨有無缺失、融合、縱裂等畸形；觀察胸骨的發育和數目，有無胸骨缺失等；檢查肋

5、骨有無融合肋、分叉肋、肋骨中斷、缺肋、短肋、波狀肋、多肋畸形等；最后檢查四肢骨畸形。（7)每窩取約 1/31/2 活胎鼠浸入固定液 2 周，作內臟檢查。將已固定的胎鼠用水沖凈，仰放于石蠟板上。剪去四肢和尾，用刀片在頭頸部常規共切 4 刀，再用剪刀剖開胸、腹腔。著重檢查:有無裂舌、雙叉舌、裂腭及眼、鼻和腦部的畸形；是否出現右位心、心臟過大、肺過大或過小等畸形；消化系統和泌尿生殖系統各器官的大小、形狀以及位置；有無腎盂積水，雙側有無睪丸，以及子宮發育不全等畸形。2.3.10.6 評價規定 主要觀察動物畸胎出現率，同時觀察其他指標，如著床數、活胎數、晚期死胎數、早期死亡數，以及活胎體重、身長、尾長等。觀察全部結果的劑量-反應關系，確定受試物的母體毒性、發育毒性及致畸性。求出受試物的最小致畸劑量和最大無致畸作用劑量。對致畸強度應以致畸指數表示。致畸指數=(雌鼠 LD50)/(最小致畸劑量)致畸指數小于或等于 10 為基本不致畸；大于 10 至 100 為致畸；大于100 為強致畸。